Hibridisasi in situ

The hibridisasi in situ adalah kaedah untuk mengesan penyimpangan kromosom. Kromosom tertentu ditandai dengan pewarna pendarfluor dan terikat pada probe DNA. Teknik ini digunakan untuk diagnosis pranatal mutasi gen.

Apa itu hibridisasi in situ?

Sekiranya hibridisasi in situ atau Fiboresensi hibridisasi in situ asid nukleik dari RNA atau DNA dikesan dalam tisu atau sel tertentu menggunakan kaedah genetik molekul. Biasanya diagnosis jenis ini digunakan untuk mengesan kelainan kromosom struktur atau numerik semasa kehamilan.

Untuk tujuan ini, probe buatan buatan digunakan, yang terdiri daripada asid nukleik. Ia kemudian mengikat asid nukleik dalam organisma melalui pasangan asas. Ikatan ini dimaksudkan dengan istilah hibridisasi. Bukti berdasarkan struktur hidup pesakit dan oleh itu sesuai dengan bukti in-situ. Ini mesti dibezakan dengan kaedah in-vitro di mana pengesanan dilakukan di tabung uji. Kaedah ini dikembangkan pada abad ke-20 oleh saintis Joe Gall dan Mary Lou Pardue.

Teknologi telah berkembang sejak itu. Walaupun probe radioaktif digunakan pada masa itu, misalnya, probe berlabel pendarfluor dengan ikatan kovalen dengan molekul pelabelan digunakan hari ini.

Fungsi, kesan & matlamat

Hibridisasi in-situ biasanya digunakan untuk mengesan penyimpangan kromosom, iaitu anomali kromosom yang tidak dapat dikesan dalam karioogram. Ini bermaksud kaedah ini selalu digunakan ketika penyakit keturunan harus ditentukan semasa kehamilan.

Oleh kerana penyimpangan kromosom adalah masalah yang tidak boleh diremehkan hari ini, penggunaan kaedah ini meningkat dari masa ke masa. Hibridisasi berlaku berdasarkan sel asli dari cecair ketuban ibu. Asas teknologi adalah pengikatan probe bertanda warna ke bahagian DNA. Berkat pengikatannya, jumlah salinan kemudian dapat dinilai dengan mikroskop, kerana salinan masing-masing memancarkan isyarat cahaya dan dengan demikian dapat dilihat di bawah mikroskop. Terdapat prosedur yang berbeza. Sama ada analisis berlaku sejurus selepas mengikat.

Dalam kes ini, pewarna pendarfluor seperti biotin digunakan, yang terikat terus ke probe DNA. Dengan kaedah tidak langsung hibridisasi in-situ, penilaian tidak dapat dilakukan segera setelah hibridisasi, kerana bahan pendarfluor hanya dapat mengikat probe setelah hibridisasi. Kaedah tidak langsung ini lebih kerap digunakan berbanding kaedah langsung kerana dipercayai lebih sensitif. Sebagai tambahan kepada probe DNA sentrometer khusus kromosom, terdapat juga probe DNA khusus lokus, probe perpustakaan DNA khusus kromosom dan hibridisasi genom perbandingan.

Probe DNA sentrometer khusus kromosom dapat digunakan untuk mengesan anomali numerik kromosom. Ini bermaksud bahawa ia digunakan terutamanya apabila terdapat kecurigaan kromosom yang digandakan atau dihapus. Probe DNA khusus lokasi sangat sesuai untuk pengesanan mutasi minimum yang tidak dapat dikesan dalam karyogram. Probe perpustakaan DNA khusus kromosom digunakan khususnya untuk mengesan penyisipan dan translokasi.

Hibridisasi genom perbandingan, sebaliknya, adalah analisis komprehensif mengenai kerugian dan keuntungan bahan kromosom. Hari ini, hibridisasi in-situ sangat penting dalam diagnosis pelbagai mutasi kromosom.Dalam diagnosis sindrom Down, contohnya probe mengikat kromosom 21. Untuk tujuan ini, probe khusus kromosom biasanya digunakan, yang boleh digunakan jika penyakit ini disyaki.

Kecurigaan boleh timbul, misalnya, jika ibu bapa sebelumnya telah melahirkan anak dengan penyakit dan gambar ultrasound tidak normal. Sekiranya terdapat ikatan tiga dan bukan ikatan ganda dan dengan itu isyarat warna tiga kali lipat dikeluarkan, diagnosis dianggap disahkan.

Risiko, kesan sampingan & bahaya

Berbeza dengan, misalnya, PCR, hibridisasi in-situ secara signifikan kurang rentan terhadap pencemaran. Di samping itu, masa yang diperlukan untuk proses ini jauh lebih sedikit. Namun, kerana embrio secara khusus membentuk corak kromosom, suatu corak tidak dapat digunakan untuk menentukan dengan pasti sebaran kromosom selebihnya dan dengan demikian status genetik sel lain.

Isyarat warna juga boleh bertindih atau tetap tidak dapat dilihat dengan alasan lain. Akibatnya, hibridisasi in-situ sebagai alat diagnostik cenderung terdedah kepada kesalahan semasa kehamilan. Kesalahan diagnosis boleh timbul dan ibu bapa boleh memutuskan untuk menentang embrio yang sihat. Untuk mengurangkan kerentanan terhadap kesalahan hibridisasi in situ, sekurang-kurangnya dua sel embrio harus diperiksa secara serentak. Dengan memeriksa dua sel secara selari, kini hanya terdapat risiko salah diagnosis.

Dalam kes sedemikian, ibu bapa boleh bergantung pada diagnosis. Hibridisasi in-situ tidak ditawarkan kepada setiap wanita hamil, tetapi hanya untuk wanita dari kumpulan risiko. Walaupun begitu, wanita hamil tidak dinafikan diagnosis jenis ini atas permintaan mereka sendiri. Penemuan ultrasound yang tidak normal atau serum yang tidak normal dapat mendorong doktor untuk menawarkan prosedur diagnostik. Walaupun sebahagian besar, tetapi tidak semestinya, penyimpangan kromosom dapat didiagnosis menggunakan hibridisasi in-situ.

Oleh itu, hibridisasi in situ tidak boleh dilakukan sendiri, tetapi mesti selalu digunakan bersamaan dengan ujian kromosom konvensional. Penjagaan wanita hamil memainkan peranan utama dalam prosedur ini. Sebelum analisis, ada perbincangan mendalam dengan ibu hamil mengenai kaedah diagnostik, yang menjelaskan risiko, kemungkinan dan had teknologi.